Optimized protocol for isolation of newborn mouse snails for creation of screening systems for otoprotective substances

Актуальность. Сенсоневральная тугоухость является распространённой формой нарушения слуха. Данная патология у детей может приводить к отставанию в развитии и нарушению способности к обучению и социальному взаимодействию. Причиной указанных форм нарушений слуха у детей является применение аминогликозидных антибиотиков. В связи с этим актуальной является создание экспериментальных моделей скрининга и разработка отопротекторов, позволяющих предотвратить развитие аминогликозидной ототоксичности. В области разработки отопротекторов широкое применение нашли модели ex vivо и in vitro из образцов улитки новорождённых животных. Изоляция улитки из костей черепа сопряжена с высоким риском механического повреждения отической капсулы и перепончатого лабиринта, что может отразиться на качестве выделяемых образцов. Цель: разработать и оптимизировать протокол выделения улитки новорождённых мышей, позволяющий сохранить морфологическую целостность отической капсулы и структур перепончатого лабиринта.

Материалы и методы. Изоляция улитки неонатальных мышей (P1-P3) из височной кости была проведена с помощью «Stereomicroscope Olympus SZX7» («Olympus Corporation»). Диссекция костей черепа осуществлялась с использованием ультратонких пинцетов Dumont #4, Dumont #55 в холодном сбалансированном солевом растворе Хэнкса (HBSS) без Ca²⁺ и Mg²⁺. Для анализа качества получаемых образцов проводился иммуноцитохимический анализ кохлеарных эксплантов с помощью окраски волосковых клеток фаллоидином, меченным Alexa Fluor 488. Участки кохлеарного экспланта считались морфологически неповреждёнными, когда демонстрировалась сохраненная архитектура с четырьмя чётко видимыми рядами внутренних и внешних волосковых клеток.

Результаты. Для изоляции улитки мы использовали ключевые анатомические ориентиры: клиновидно-затылочный, клиновидно-каменистый и каменисто-затылочный синхондрозы, а также каменисто-чешуйчатый шов. Такой подход уменьшает вероятность чрезмерного механического влияния на отическую капсулу и структуры перепончатого лабиринта за счёт диссекции тканей по естественным границам костей черепа. Применение протокола позволило получать интактные кохлеарные экспланты с сохранной архитектурой волосковых клеток.

Заключение. Применение разработанного протокола позволяет уменьшить риск механических повреждений отической капсулы и структур перепончатого лабиринта у новорождённых мышей. Особенно полезен данный проток для исследователей, осваивающих навык создания in vivo и ex vivo систем внутреннего уха.